根据临床症状、X线及血液检查、痰培养等辅助检查，可明确诊断。
典型症状：出现持久的、阵发性剧烈咳嗽，常夜间加重。
痰培养：能在痰液中分离出支原体，是作为诊断肺炎支原体感染的金标准。
X线检查：肺部有多形态浸润影，呈节段性的分布。
血液检查：血白细胞总数正常或偏高，血清支原体IgM抗体≥1：64。
冷凝集试验：结果阳性，滴度≥1：32。
肺炎支原体核酸检测：适用于早期、快速诊断以及筛查。
PCR技术（聚合酶链式反应）：对支原体DNA敏感性和特异性较高，能作为早期诊断。
成人肺炎支原体感染也是一种相当严重的感染性疾病，患病时很容易导致出现咳嗽、发热以及胸闷、气短或者是呼吸困难的症状，而且有些患者还会伴有精神萎靡不振或者是浑身乏力的情况出现。所以患病时需要及时的进行抗感染治疗，可以使用一些抗生素类的药物，这样能够帮助有效的缓解感染的情况。
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肺炎支原体感染1比640，其严重程度则不应仅根据该数据判定，还应结合患者临床症状，以及相关辅助检查综合判定。对于肺炎支原体抗体1比640，则考虑为阳性，但还应进一步完善相关检查，如行支原体抗体IgM阳性，考虑为肺炎支原体感染。此外，应结合症状，如出现发热、全身酸痛、乏力等症状，则应予以抗支原体治疗。可选择大环内酯的药物，而对于单纯的肺炎支原体阳性，则不能仅判定为支原体肺炎。
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儿童肺炎支原体感染分为两个问题。第一，感染的轻与重。第二，感染后的治疗。感染的轻与重，决定了感染是不是严重。如果感染比较轻，疾病就比较轻。感染比较重，就可能要进一步住院治疗，甚至是静脉用药。儿童支原体感染，他的轻与重主要是看他的症状、体征、实验室检查。
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